博萊霉素的試驗要點本篇告訴你

　　博萊霉素與鐵的復合物嵌入DNA，引起DNA單鏈和雙鏈斷裂。不引起RNA鏈斷裂。作用的第1步是本品的二噻唑環(huán)嵌入DNA的G-C堿基對之間，同時末端三肽氨基酸的正電荷和DNA磷酸基作用，使其解鏈。作用的第二步是本品與鐵的復合物導致超氧或羥自由基的生成，引起DNA鏈斷裂?？诜o效，需經肌內或靜脈注射。
 

　　博萊霉素的實驗要點：
 

　　1、CTAB溶液在低于15℃時會析出沉淀，因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預熱。
 

　　2、在適條件下，DNA—CTAB沉淀呈白色纖維狀，很容易一下子就從溶液中鉤出。不過，某些植物種的DNA沉淀中可能含有雜質，特別是多糖，使DNA沉淀呈絮狀或膠狀，這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA.—CTAB沉淀。
 

　　3、飽和酚雖然可有效地使蛋白質變性，但酚不能*抑制RNA酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和L仿的混合液，可減輕這兩種現(xiàn)象，同時可加入適量的異戊醇(苯酚—L仿—異戊醇=25:24:1)，異戊醇的作用是消泡，并使蛋白質層緊密，使水相和有機相分層較好。
 

　　細菌的培養(yǎng)和收集將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/mlAmp)中,37℃培養(yǎng)12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5mlLB液體培養(yǎng)基(含50μg/mlAmp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時至對數(shù)生長后期。
 

　　非凍型組織RNA保存液小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
 

　　博萊霉素特點如下：
 

　　1、非凍保存提取RNA用的新鮮組織，在37℃下可保存1天，25℃下可保存1周，4℃下可保存1月，在-20℃或-80℃下可長期保存。其間樣品可反復凍融十多次。
 

　　2、應用范圍廣，可用于保存，郵寄和運輸病毒、細菌、果蠅、植物組織、動物組織、培養(yǎng)細胞、懸浮細胞(白細胞、流式細胞儀收集的細胞)等。
 

　　3、兼容性廣，RNALOCKER保存的樣品可以直接用于RNA提取也可直接用于組織切片、免疫學和流式細胞分析。
 

　　4、結果準確，本產品進入細胞后能迅速鎖定RNA水平，使實驗結果更能準確反映取樣時基因表達譜的真實狀態(tài)。