使用抗生素和抗真菌素進行去污培養(yǎng)

使用抗生素和抗真菌素進行去污培養(yǎng)
當不可替代的培養(yǎng)細胞發(fā)生污染時，研究人員可以嘗試消除或控
制污染。首先，確定污染類型是細菌、真菌、支原體還是酵母。
將污染的培養(yǎng)物與其他細胞系隔離。實驗用消毒劑清洗培養(yǎng)箱和
層流通風櫥，檢查HEPA（粒子空氣）過濾器。
高濃度的抗生素和抗真菌素可能對某些細胞系有毒害作用。因
此，應測定劑效關(guān)系以確定抗生素和抗真菌素的毒性劑量。這一
點在使用Amphotericin B solubilized等抗真菌素或泰樂菌素等抗生
素時至關(guān)重要。下面給出了確定毒性劑量和去污培養(yǎng)的推薦步驟。
1．解離細胞，計算細胞個數(shù)，然后在不含抗生素的培養(yǎng)基中稀釋細
胞。將細胞稀釋到常規(guī)細胞傳代所需的濃度。                                                                                              2．將細胞懸浮液轉(zhuǎn)入多孔培養(yǎng)板或幾個小培養(yǎng)瓶中。按濃度梯度將
選用的抗生素加入到每孔中。
3．每天觀察細胞的毒性跡象，如塌陷、液泡的出現(xiàn)、匯合度下降或
者變圓。
4．確定抗生素的毒性劑量后，使用比毒性劑量低1-2倍濃度的抗生
素培養(yǎng)細胞2-3代。
5．用無抗生素培養(yǎng)基培養(yǎng)一代細胞。
6．重復第4步。
7．在無抗生素培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代細胞以確定污染是否已經(jīng)消除。