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粒體檸檬酸( MCA)含量試劑盒 說(shuō)明 技術(shù)文章

更新時(shí)間:2019-06-13  |  點(diǎn)擊率:2848

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線粒體檸檬酸(Mitochondrion Citric Acid, MCA)含量 試劑盒

商品貨號(hào):QS2107
英文名稱:Mitochondrial citric acid(MCA) Content Assay Kit
別名:線粒體檸檬酸含量測(cè)定試劑盒 MCA Kit 線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)定試劑盒 線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒
檢測(cè)方法:常量法

 

商品貨號(hào):商品品牌:規(guī)格基本售價(jià)選擇規(guī)格
QS2107-25管/24樣 25管/24樣¥2000.00元 
QS2107-50管/48樣 50管/48樣¥2500.00元 

 

產(chǎn)品詳細(xì)介紹

 

測(cè)定意義:

CA是線粒體三羧酸循環(huán)的個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。

配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度,(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況,(3)乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。

測(cè)定原理:

CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長(zhǎng)下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。

 

 

產(chǎn)品說(shuō)明書

貨號(hào):QS2107-25                        規(guī)格:25 管/24 樣

 

   線粒體檸檬酸(Mitochondrion citric acid, MCA)含量試劑盒說(shuō)明書

                 分光光度法

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

CA 是線粒體三羧酸循環(huán)的個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成, 其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。 配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 CA 含量, 其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度,(2)綜合分析丙酮 酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰 CoA 含量變化可以反映脂肪酸β -氧化途徑提供的乙酰 CoA 情況,(3)乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 CA 含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。

測(cè)定原理:

CA 在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α -酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α -酮酸進(jìn)一 步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α -酮酸苯腙;α -酮酸苯腙在 330nm 處有吸收峰,該波長(zhǎng)下吸光度 的變化程度可反映出 CA 的含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 石英比色皿、研缽和蒸餾水。

試劑組成和配制:

酸性提取液:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。

堿性提取液:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 7.5mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 2.5mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 7.5mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑 4℃ 保存;

標(biāo)準(zhǔn)品:液體 1mL×1 支,10μ mol/mL 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

線粒體中檸檬酸提?。?/strong>

    稱 0.05~0.1g 樣品(建議稱 0.1g 樣本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃離心 5min;取上清至另一 EP 管中,11000g/min 4℃離心 10min,棄上清(取 300μ L 該上 清液和 300μ L 堿性提取液中和后可用于細(xì)胞質(zhì) CA 含量測(cè)定);沉淀即線粒體,向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液,充分懸浮溶解,超聲波破碎(功率 20%,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),取此溶液 300μ L 和 300μ L 堿性提取液中和,混勻,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量 測(cè)定)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 330nm,蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一、二和三 37℃預(yù)熱 10min。

3、樣本測(cè)定:

空白管和標(biāo)準(zhǔn)管通常只需要各做一個(gè)。

試劑名稱(μ L)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管
試劑一300300300
蒸餾水300  
標(biāo)準(zhǔn)液 300 
樣本  300
試劑二100100100
試劑三300300300

充分混勻,330nm 立即測(cè)定初始吸光值 A1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 A2,Δ A=A2 –A1。

 

檸檬酸含量計(jì)算:

(1)按蛋白濃度計(jì)算

檸檬酸含量(μ mol/mg prot)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(Δ A 測(cè)定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 標(biāo)準(zhǔn)管-Δ A 空白 管) ×V 樣]÷(V 樣÷Cpr)=10×(Δ A 測(cè)定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 標(biāo)準(zhǔn)管-Δ A 空白管)÷Cpr 蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。

(2)按樣本鮮重計(jì)算

檸檬酸含量(μ mol/g 鮮重)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(Δ A 測(cè)定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 標(biāo)準(zhǔn)管-Δ A 空白 管) ×V 樣]÷(W×V 樣÷V 樣總)=10×(Δ A 測(cè)定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 標(biāo)準(zhǔn)管-Δ A 空白 管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)液濃度,10μ mol/mL; V 樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積:0.3mL;V 樣總:加 入提取液體積:1mL;Cpr:樣品蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。

注意事項(xiàng):

低檢測(cè)限為10nmol/mg prot或1μ mol/g鮮重。

 

三羧酸循環(huán)系列   單價(jià) 
QS2100α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS2100α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)測(cè)試盒微量法 100管/96樣1400
QS2101檸檬酸(CA)含量測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣350
MS2101檸檬酸(CA)含量測(cè)試盒微量法 100管/96樣690
QS2102琥珀酸脫氫酶(SDH)測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣260
MS2102琥珀酸脫氫酶(SDH)測(cè)試盒微量法 100管/96樣500
QS2103丙酮酸脫氫酶(PDH)測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣720
MS2103丙酮酸脫氫酶(PDH)測(cè)試盒微量法 100管/96樣1400
QS2104線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)測(cè)試盒 紫外分光光度法50管/48樣530
MS2104線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)測(cè)試盒 微量法 100管/96樣1000
QS2106-50乙酰輔酶A測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣3200
QS2106-25乙酰輔酶A測(cè)試盒紫外分光光度法25管/24樣2000
MS2106乙酰輔酶A測(cè)試盒微量法 100管/96樣5800
QS2107-50線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣2500
QS2107-25線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒紫外分光光度法25管/24樣1500
MS2107線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒微量法 100管/96樣4700
QS2206乳酸含量(LA)測(cè)試盒可見分光光度法50管/24樣650
MS2206乳酸含量(LA)測(cè)試盒微量法 100管/48樣1280
QS2204丙酮酸(PA)含量測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣300
MS2204丙酮酸(PA)含量測(cè)試盒微量法 100管/96樣580

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