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谷氨酸脫氫酶(GDH)試劑盒說明書 技術(shù)文章

更新時間:2019-06-06  |  點擊率:2807
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谷氨酸脫氫酶(Glutamate Dehydrogenase,GDH)活性檢測試劑盒

商品貨號:MS1803
英文名稱:Micro Glutamic Acid Dehydrogenase(GDH)Assay Kit
別名:谷氨酸脫氫酶試劑盒 GDH Kit 谷氨酸脫氫酶(GDH)試劑盒 谷氨酸脫氫酶(GDH)測試盒
檢測方法:微量法

 

商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
MS1803 -100管/96樣索橋生物100管/96樣¥1100.00元 

 

  • 產(chǎn)品詳細介紹

 

測定意義:

GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。

測定原理:

GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光度下降。通過測定340nm吸光度的下降速率,計算GDH活性。

 

 

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  • 產(chǎn)品說明書

 

貨號:QS1803                                                 規(guī)格:50 管/48 樣

谷氨酸脫氫酶(Glutamate dehydrogenase,GDH)試劑盒說明書 紫外分光光度法

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成, 在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。

測定原理:

GDH 催化 NH4 +、α -酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和 NAD+,引起 340nm 吸光度下降。通過 測定 340nm 吸光度的下降速率,計算 GDH 活性。

自備實驗用品及儀器:

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1 支,4℃保存;

試劑三:粉劑×1 支,4℃保存;

試劑四:粉劑×1 支,-20℃保存。

粗酶液提?。?/strong>

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(10^4 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超 聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃ 離心 10min,取上清,置冰上待測。 

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、分光光度計預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

(1)工作液的配制:臨用前將試劑二、三、四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解,置于 37℃(哺乳動 物)或 25℃(其它物種)水浴 5min;現(xiàn)配現(xiàn)用; 

(2)取 0.05mL 樣本和 1mL 工作液于 1mL 比色皿中,混勻,加工作液的同時開始計時,在 340 nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒時的吸光度 A2,計算 Δ A=A1-A2。

GDH 活性計算:

1、血清(漿)中 GDH 活力的計算:

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 GDH(nmol/min/mL)=[Δ A×V 反總÷(ε ×d)×10^9 ]÷V 樣÷T=675×Δ A

2、組織、細菌或細胞中 GDH 活力的計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

GDH(nmol/min /mg prot)=[Δ A×V 反總÷(ε ×d)×10^9 ]÷(V 樣×Cpr) ÷T=675×Δ A÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

GDH ( nmol/min /g 鮮 重 ) = [Δ A×V 反 總 ÷ ( ε ×d ) ×10^9 ]÷(W× V 樣 ÷V 樣 總 ) ÷T=675×Δ A÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 GDH(nmol/min /10^4 cell)=[Δ A×V 反總÷(ε ×d)×10^9 ]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=1.35×Δ A

V 反總:反應體系總體積,1.05×10^-3 L;ε :NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×10^3 L / mol /cm; d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T: 反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù), 500 萬。

 

系列產(chǎn)品及價格

氮代謝系列    
QS1800硝酸還原酶(NR)測試盒可見分光光度法50管/24樣240
MS1800硝酸還原酶(NR)測試盒微量法100管/48樣450
QS1801谷氨酸合成酶(GOGAT)測試盒 紫外分光光度法50管/48樣500
MS1801谷氨酸合成酶(GOGAT)測試盒微量法100管/96樣950
QS1802谷氨酰胺酶(GLS)測試盒可見分光光度法50管/48樣580
MS1802谷氨酰胺酶(GLS)測試盒微量法100管/96樣1100
QS1803谷氨酸脫氫酶(GDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣580
MS1803谷氨酸脫氫酶(GDH)測試盒微量法100管/96樣1100
QS1805水土中亞硝酸鹽含量測試盒可見分光光度法50管/48樣140
MS1805水土中亞硝酸鹽含量測試盒微量法100管/48樣270
QS1806食品中亞硝酸鹽含量測試盒可見分光光度法50管/48樣200
MS1806食品中亞硝酸鹽含量測試盒微量法100管/96樣380
QS1807谷氨酰胺合成酶(GS)測試盒可見分光光度法50管/24樣280
MS1807谷氨酰胺合成酶(GS)測試盒微量法100管/48樣550
QS1808植物硝態(tài)氮測試盒可見分光光度法50管/48樣360
MS1808植物硝態(tài)氮測試盒微量法100管/96樣700
QS1811植物氨態(tài)氮測試盒可見分光光度法50管/48樣500
MS1811植物氨態(tài)氮測試盒微量法100管/96樣960
QS1812尿素氮測試盒可見分光光度法50管/48樣70
MS1812尿素氮測試盒微量法100管/96樣100
QS1813亞硝酸還原酶(NiR)測試盒可見分光光度法50管/24樣650
MS1813亞硝酸還原酶(NiR)測試盒微量法100管/48樣1250
QS1814脲酶(UE)測試盒可見分光光度法50管/24樣380
MS1814脲酶(UE)測試盒微量法100管/48樣750

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