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一氧化氮(NO)含量測定試劑盒說明書 技術(shù)文章

更新時間:2019-06-06  |  點擊率:6789
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一氧化氮(Nitric Oxide,NO)含量檢測試劑盒

商品貨號:MS1804
英文名稱:Nitric oxide Assay Kit
別名:一氧化氮含量檢測試劑盒
檢測方法:微量法

 

商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
MS1804-100管/96樣索橋生物100管/96樣¥390.00元 

 

  • 產(chǎn)品詳細(xì)介紹

測定意義:

NO(Nitric Oxide,NO)廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中,特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì),發(fā)揮信號傳遞的作用,是一種新型的生物信使分子,在機(jī)體的生理、病理過程中起著重要的作用。

測定原理:

NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成 NO2-,在酸性條件下,NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合,產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰,測定其吸光值,可以計算NO含量。為了排除樣品色素等的影響,每個樣品需做對照管。

 

 

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  • 產(chǎn)品說明書
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貨號:QS1804                        規(guī)格:50 管/24 樣

一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量測定試劑盒說明書 可見分光光度法

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

NO(Nitric Oxide,NO)廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng) 中,特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì),發(fā)揮信號傳遞的作用,是 一種新型的生物信使分子,在機(jī)體的生理、病理過程中起著重要的作用。

測定原理:

NO 在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成 NO2-,在酸性條件下,NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化 合物,進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合,產(chǎn)物在 550nm 處有特征吸收峰,測定其吸光值,可以計 算 NO 含量。為了排除樣品色素等的影響,每個樣品需做對照管。

自備實驗用品及儀器:

天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿、蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 6mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 6mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 12mL×1 瓶,4℃避光保存。

樣品處理:

1. 組織:

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加 入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。10000g,4℃離心 15min,取上清,置冰上待測。

2. 細(xì)菌、真菌:

按照細(xì)胞數(shù)量(10^4個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時 間 3min);然后 10000g,4℃,離心 15min,取上清置于冰上待測。

3. 體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品:直接測定。

測定步驟和操作表

           對照管        測定管

樣品(μ L)     400         400

試劑一(μ L)              250

試劑二(μ L)   250

試劑三(μ L)   250         250

混勻,4℃靜置 15min,以對照管調(diào)零,1mL 玻璃比色皿,測定 A550。

NO 含量計算:

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y= 0.016x -0.0103,R2 = 0. 9986

1、組織樣品:

NO 含量定義:25℃時,每克樣品或每毫克蛋白 15min 生成 1μ moL NO2 -,相當(dāng)于 1μ moL NO。 (1)按樣本質(zhì)量計算

NO 含量(μ moL/g)=(A550 +0.0103)÷0.016×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10-3 = 0.14×(A550 +0.0103)÷W

(2)按樣本蛋白濃度計算

NO 含量(μ moL/mg prot)=(A550 +0.0103)÷0.016×V 反總÷(V 樣×Cpr)×10-3 = 0.14×(A550 +0.0103)÷Cpr

2、其他樣品:

NO 含量定義:25℃時,每升樣品 15min 生成 1μ moL NO2-,相當(dāng)于 1μ moL NO。

NO 含量(μ moL/L)=(A550 +0.0103)÷0.016×V 反總÷V 樣 = 140×(A550 +0.0103)

V 反總:反應(yīng)總體積,0.9mL;V 樣:反應(yīng)中樣品體積,0.4mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL; W:樣品質(zhì)量,g;Cpr:蛋白濃度,mg/mL

注意事項:

1. 試劑盒 2-8℃保存。

2. 盡量使用新鮮樣品進(jìn)行檢測,試劑三有腐蝕性,操作時請做好防護(hù)措施。

3. 若檢測出得 OD 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍外,請將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐饪s或稀釋,并在計算公式中除 以濃縮倍數(shù)或者乘以稀釋倍數(shù)。

4. 低檢出限為 0.65μ moL/L。

 

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