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醇脫氫酶(ADH)測試盒 微量酶標(biāo)儀法 說明 技術(shù)文章

更新時間:2019-06-04  |  點(diǎn)擊率:2771

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乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒

商品貨號:MS1007
英文名稱:Alcohol Dehydrogenase (ADH) Assay Kit
別名:乙醇脫氫酶試劑盒 ADH Kit 乙醇脫氫酶(ADH)試劑盒
檢測方法:微量法

 

商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
MS1007-100管/96樣索橋生物100管/96樣¥550.00元 

測定意義:

ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

測定原理:

ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測定340nm 吸光度下降速率,來計(jì)算ADH活性。

 

貨號:MS1007                                                     規(guī)格:100管/96樣

乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒說明書

微量法

注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

測定原理:

ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測定340nm 吸光度下降速率,來計(jì)算ADH活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。臨用前把試劑三轉(zhuǎn)移到試劑二中,4℃保存。                  

試劑三:粉劑×1支,-20℃保存。

試劑四:液體×1支,4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

  1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4離心20min,取上清置冰上待測。
  2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

3、血清等液體:直接測定。

ADH測定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。

3. 空白管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL蒸餾水、160μL試劑二和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。

4. 測定管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL上清液、160μL試劑二和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A3和A4。△A測定管=A3-A4。

注意:空白管只需測定一次。

計(jì)算公式:

a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

(1)按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T

=1.61×(△A測定管△A空白管) ÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (μmol/min/g 鮮重) =[(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1.61×(△A測定管△A空白管) ÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (μmol/min/104cell) = [(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1.61×(△A測定管△A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (μmol/min/mL) = [(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷V樣÷T

=1.61×(△A測定管△A空白管)

ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,1min。

b.使用96孔板測定的計(jì)算公式如下

(1)按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T

=1.61×(△A測定管△A空白管) ÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (μmol/min/g 鮮重) =[(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1.61×(△A測定管△A空白管) ÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (μmol/min/104cell) = [(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1.61×(△A測定管△A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1μmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (μmol/min/mL) = [(△A測定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷V樣÷T

=1.61×(△A測定管△A空白管)

ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.5 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,1min。

注意事項(xiàng):

  1. 上清液蛋白質(zhì)濃度需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
  2. 配制好的試劑二3天使用完。
輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒可見分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣320
MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒微量法100管/96樣600
QS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  可見分光光度法50管/48樣450
MS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  微量法100管/96樣850
QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法50管/48樣3200
QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法25管/24樣2000
MS1005檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法100管/48樣3500
QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測試盒可見分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   微量法100管/96樣2500

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