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醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒 常量可見分光光度法 說(shuō)明 技術(shù) 文章

更新時(shí)間:2019-04-10  |  點(diǎn)擊率:2457

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乙醇脫氫酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)活性測(cè)定試劑盒

商品貨號(hào):QS1007
英文名稱:Alcohol Dehydrogenase (ADH) Assay Kit
別名:乙醇脫氫酶試劑盒 ADH Kit 乙醇脫氫酶(ADH)試劑盒
檢測(cè)方法:常量法

 

商品貨號(hào):商品品牌:規(guī)格基本售價(jià)選擇規(guī)格
QS1007-50管/48樣 50管/48樣¥280.00元 

測(cè)定意義:

ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過(guò)程中起著重要作用。哺乳動(dòng)物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

測(cè)定原理:

ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測(cè)定340nm 吸光度下降速率,來(lái)計(jì)算ADH活性。

 

貨號(hào): QS1007                                             規(guī)格:50管/48樣

乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase,ADH)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

紫外分光光度法

注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過(guò)程中起著重要作用。哺乳動(dòng)物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

測(cè)定原理:

ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測(cè)定340nm 吸光度下降速率,來(lái)計(jì)算ADH活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。臨用前把試劑三轉(zhuǎn)移到試劑二中,4℃保存。                 

試劑三:粉劑×1支,-20℃保存。

試劑四:液體×1瓶,4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

  1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測(cè)。
  2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測(cè)。

3、血清等液體:直接測(cè)定。

ADH測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。

3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。

4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。

注意:空白管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式:

(1)按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A測(cè)定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T

=1.61×(△A測(cè)定管△A空白管) ÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1μmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (μmol/min/g鮮重) =[(△A測(cè)定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1.61×(△A測(cè)定管△A空白管) ÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1μmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (μmol/min/104cell) = [(△A測(cè)定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1.61×(△A測(cè)定管△A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1μmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (μmol/min/mL) = [(△A測(cè)定管△A空白管)÷ε÷d×V反總×106] ÷V樣÷T

=1.61×(△A測(cè)定管△A空白管)

ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1min。

注意事項(xiàng):

  1. 上清液蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
  2. 配制好的試劑二3天使用完。

 

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒可見分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣320
MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣600
QS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  可見分光光度法50管/48樣450
MS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  微量法100管/96樣850
QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣3200
QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見分光光度法25管/24樣2000
MS1005檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒微量法100管/48樣3500
QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   微量法100管/96樣2500

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