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CS測(cè)試盒 微量酶標(biāo)儀法 說(shuō)明 技術(shù) 文章

更新時(shí)間:2019-04-03  |  點(diǎn)擊率:2258

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檸檬酸合酶(Citrate Synthase,CS)活性檢測(cè)試劑盒

商品貨號(hào):MS1005
英文名稱(chēng):Micro Citrate Synthase(CS)Assay Kit
別名:檸檬酸合酶試劑盒 CS Kit 檸檬酸合酶(CS)試劑盒 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒,生化法試劑盒
檢測(cè)方法:微量法

 

商品貨號(hào):商品品牌:規(guī)格基本售價(jià)選擇規(guī)格
MS1005 -100管/48樣索橋生物100管/48樣¥3500.00元 

 

測(cè)定意義:

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。

測(cè)定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

 

 

貨號(hào):MS1005                                                     規(guī)格:100管/96樣

檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:                          

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。

測(cè)定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無(wú)水乙醇和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,-20℃保存;

試劑二:液體20mL×1瓶,-20℃保存;

試劑三:液體1.5mL×1支,-20℃保存;

試劑四:液體28mL×1瓶,4℃保存;

試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存;

試劑六:粉劑×1支,-20℃保存,臨用前加入1.2mL蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;

樣本的前處理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

  • 稱(chēng)取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  • 將勻漿600g,4℃離心5min。
  • 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
  • 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。
  • 在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體CS測(cè)定。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定

(1)在試劑五中加入0.6mL無(wú)水乙醇和13mL試劑四,混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

(2)測(cè)定管:在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、220μL試劑五和10μL試劑六,混勻,37℃反應(yīng)15min后立即測(cè)定吸光值A(chǔ)1。

(3)對(duì)照管:在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、220μL試劑四和10μL試劑六,混勻,37℃反應(yīng)15min后立即測(cè)定吸光值A(chǔ)2。

(4)計(jì)算ΔA=A1-A2,每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

CS活性計(jì)算:

  1. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。

CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。

CS(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=23.8×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。

CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.0475×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2.4×10-4 L;ε:TNB摩爾消光系數(shù),1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn)。

  1. 使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。

CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=235.3×ΔA÷Cpr

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。

CS(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=47.5×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。

CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.095×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2.4×10-4 L;ε:TNB摩爾消光系數(shù),1.36×104 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,15 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn)。

 

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1003NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣320
MS1003NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣600
QS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  可見(jiàn)分光光度法50管/48樣450
MS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  微量法100管/96樣850
QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法50管/48樣3200
QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法25管/24樣2000
MS1005檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒微量法100管/48樣3500
QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   微量法100管/96樣2500

 

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