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NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶測(cè)試盒 微量酶標(biāo)儀法 說(shuō)明 技術(shù) 文章

更新時(shí)間:2019-03-29  |  點(diǎn)擊率:1949

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NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)活性檢測(cè)試劑盒

商品貨號(hào):MS1002
英文名稱:Micro NAD-Malate Dehydrogenase(NAD-MDH)Assay Kit
別名:NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶試劑盒 NAD-MDH Kit NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)試劑盒 NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒
檢測(cè)方法:微量法

 

商品貨號(hào):商品品牌:規(guī)格基本售價(jià)選擇規(guī)格
MS1002-100管/96樣索橋生物100管/96樣¥550.00元 

測(cè)定意義:

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH,細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。

測(cè)定原理:

NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

貨號(hào):MS1002                                                     規(guī)格:100管/96樣

NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH,細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。

測(cè)定原理:

NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一、提取液100 mL×1瓶,在4℃保存;

試劑二、液體20 mL×1瓶,在4℃保存;

試劑三、粉劑×1瓶,-20℃保存;

樣本測(cè)定的準(zhǔn)備:

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為1000~2000:1的比例(建議2000萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟:

  1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、檢測(cè)工作液的配制:用時(shí)在試劑三中加入19mL試劑二和0.5mL蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

3、測(cè)定前將檢測(cè)工作液在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

4、在微量石英比色皿或96孔板中加入5μL樣本和195μL工作液,混勻后立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A(chǔ)1和 1min20s后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NAD-MDH活力單位的計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.005 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬(wàn)。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=12860×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織中每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =12860×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=6.43×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.005 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬(wàn)。

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1003NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣320
MS1003NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣600
QS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  可見(jiàn)分光光度法50管/48樣450
MS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  微量法100管/96樣850
QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法50管/48樣3200
QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法25管/24樣2000
MS1005檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒微量法100管/48樣3500
QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   微量法100管/96樣2500

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