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乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 常量可見分光光度法 說明 技術(shù) 文章

更新時間:2019-06-04  |  點擊率:3011
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乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)試劑盒

商品貨號:QS1001
英文名稱:Lacate Dehydrogenase(LDH)Assay Kit
別名:乳酸脫氫酶試劑盒 LDH Kit 乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒
檢測方法:常量法

 

商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
QS1001-50管/24樣 50管/24樣¥170.00元 

 

  • 產(chǎn)品詳細(xì)介紹
  •  
  • 產(chǎn)品說明書

 

測定意義:

LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

貨號:QS1001                                                     規(guī)格:50管/24樣

乳酸脫氫酶(Lactate DehydrogenaseLDH)試劑盒說明書

分光光度法

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

自備實驗用品及儀器:

可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:30mL×1瓶, 4℃保存;

試劑一:液體15 mL×1瓶, 4℃保存;

試劑二:粉劑×1支,-20℃保存,用時加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用,配好后-20 ℃保存,可保存兩周,禁止反復(fù)凍融;

試劑三:液體15 mL×1瓶,4℃保存;

試劑四:液體50 mL×1瓶,4℃保存;

操作步驟:

一、樣品測定的準(zhǔn)備:  

  1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500-1000:1 的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
  2. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5-10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
  3. 血清(漿)樣品:直接檢測。

二、測定操作:

  1. 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm,蒸餾水調(diào)零。
  2. 樣本測定(在EP管中加入下列試劑)

試劑名稱(μL)

測定管

對照管

樣本

50

50

試劑一

250

250

試劑二

50

 

蒸餾水

 

50

充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴15min

試劑三

250

250

充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴15min

試劑四

750

750

充分混勻,室溫靜置3min,450 nm下測定吸光度,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需要設(shè)一個對照管。

LDH活力單位計算:

  1. 標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線, y = 0.725x (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,μmol/mL;y為對吸光度)。
  2. 血清(漿)LDH活力的計算

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(U/mL)=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA

  1. 細(xì)胞、細(xì)菌和組織中LDH活力的計算
  1. 按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(U/mg prot)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×103 =92×ΔA÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

  1. 按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(U/g鮮重)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×103 =92×ΔA÷W

  1. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(U/104 cell)= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×103 =0.184×ΔA÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本的體積,0.05 mL;V2:加入提取液的體積,1 mL; T:反應(yīng)時間,15 min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬。

 

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒可見分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣320
MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒微量法100管/96樣600
QS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  可見分光光度法50管/48樣450
MS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  微量法100管/96樣850
QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法50管/48樣3200
QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法25管/24樣2000
MS1005檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法100管/48樣3500
QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測試盒可見分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   微量法100管/96樣2500

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